一、原理
本試劑盒採用直接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被抗體，樣本中的殘留物氯黴素和氯黴素酶標記物抗原競爭微孔條上預包被的抗體，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯黴素的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物氯黴素的含量。
二、試劑盒技術指標
試劑盒靈敏度： 0.1ppb
樣本定量檢測下限
蜂蜜 0.1 ppb
牛奶 0.05 ppb
雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚 0.05 ppb
交叉反應率
氯黴素 100 %
甲砜黴素 < 0.1%
氟甲砜黴素 < 0.
樣本回收率
雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚 80%±20%
蜂蜜 75%±15%
牛奶 80%±20%
三、 試劑盒組成
1．微量測試孔： 96T/8孔
2．標準品液：（1mL/瓶）0 ppb 0.05 ppb 0.15 ppb 0.45 ppb 1.35 ppb 4.05 ppb
3．酶標記物 7 mL
4．底物緩衝液破 7 mL
5．底物液 7 mL
6．終止液 7 mL
7．20倍濃縮洗滌液 50 mL 加蒸餾水稀釋到1000 mL
8．20倍復溶液 12 mL 加蒸餾水稀釋到240 mL
四、樣本前處理步驟
1. 組織（雞肉，魚肉，蝦肉，豬肉）前處理方法
將樣品勻質，稱取樣品3g，加入3 mL蒸餾水，震盪均勻，再加入6 mL乙酸乙酯，震盪10min。5000r/min離心10min，吸取上層2 mL，40℃旋轉蒸發至干，加入1 mL正己烷溶解乾燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50µL待測。
2.牛奶，牛初乳
溶液1：0.36M亞鐵氰化鉀溶液。稱取152.06g亞鐵氰化鉀，定容至1L。
溶液2：1.04M硫酸鋅溶液。稱取299.01g硫酸鋅，定容至1L。
稱取樣品9.6mL，分別加入溶液1和溶液2各200µL，震盪均勻，5000r/min離心10min。吸取上清3mL至另一離心管中，加入6mL乙酸乙酯，震盪10min，5000r/min離心10min。吸取上層2mL，40℃選擇蒸發至干。加入1mL正己烷溶解乾燥物，再加入1mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50µL待測。
3.肝臟（豬肝）
稱取樣品3g，再加入6mL乙酸乙酯，震盪10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min，吸取上層2mL，40℃選擇蒸發至干。加入1 mL正己烷溶解乾燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50µL待測。
4.雞蛋
稱取樣品3g，加入6 mL乙酸乙酯，震盪10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min。吸取上層2 mL，40℃選擇蒸發至干。加入1 mL正己烷溶解乾燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50µL待測。
注意：
復溶時一定要先加入正己烷溶解乾燥物，再加入PBS復溶。震盪過程不宜太劇烈，防止乳化。
五、操作步驟
1． 將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存於2-8℃，不要冷凍。
3． 加標準品/樣本50µL /孔，然後加入酶標高物50µL /孔，再振盪混勻，用封板膜蓋板，37℃條件下反應25 min（室溫反應30min）。
4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
5． 顯色：每孔加入底物緩衝液50µL，再加底物液50µL，輕輕振盪混勻，37℃或室溫環境避光顯色10min。
6． 測定：每孔加入終止液50µL，輕輕振盪勻，設定酶標儀于450nm處（在20min內讀完數據），測定吸光度值。
六、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯黴素標準品濃度（ng/mL）的半對數為橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯黴素實際濃度。
七、 注意事項
1.終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
2.不要使用已過有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。
3. 0標準液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質，請勿使用。
4.顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。
八、儲藏條件和保質期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。
