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隨機引物

適用於長的或具有發卡結構的 RNA ；適用於 rRNA 、 mRNA 、 tRNA 等所有 RNA 的反轉錄反應；主要用於單一模板的 RT-PCR 反應。

Oligo dT

適用於具有 PolyA 尾巴的 RNA 。（原核生物的 RNA 、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具有 PolyA 尾巴。）由於 Oligo dT 要結合到 PolyA 尾巴上，所以對 RNA 樣品的質量要求較高，即使有少量降解也 會使全長 cDNA 合成量大大減少。

特異性引物

與模板序列互補的引物，適用於目的序列已知的情況。

抑制

不抑制

RNase A

RNase T1

RNase B

S1 核酸酶

RNase C

從曲霉屬中提出的 Rnase

活性

通過與酶分子非共價結合抑制 RNase 活性

抑制類型

競爭性抑制

結合常數

Ki=4.4×1014

與 RNaseA 結合比例

1:1

分子量

51,000 道爾頓

等電點

pH4.7

自由巰基

30

pH 的適應範圍

pH5-8( 在 pH7-8 具有最高活性 )

金牌酶（熱啟動酶）

金牌酶用途

主要用於 PCR 擴增和一步法 RT － PCR ；特別適合臨床 PCR 診斷試劑，這樣可以降低運輸條件和降低對臨床操作人員的要求。

金牌酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經誘導表達后，經過化學修飾，再經三次過柱純化分離出來的重組蛋白。

•  在常溫下沒有聚合酶的活性，需經過 95 ℃ 4mins 的高溫造成化學修飾基團的脫落，然後纔有聚合的活性；這樣就避免在低溫階段的非特異性擴增；大大提高了 PCR 反應的靈敏度和特異性。隨着 PCR 擴增的進行，酶活性會被逐步釋放，這樣就有效提高擴增效率及產物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；無 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用於實時熒光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，產物經純化后可直接用於 T － A 克隆。

•  無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。

•  最佳延伸溫度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 濃度 1.5mM ，最佳 dNTPS 濃度 0.2mM , 延伸速度為 2000base/min 。

金牌酶單位定義

在 74℃ 條件下， 30 分鐘內催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。反應條件為： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應體積為 50ml 。

金牌酶(熱啟動酶)　（大宗用戶價格面議，電話：021－54460831）

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Tth DNA 聚合酶

用途

主要用於 PCR 擴增和一步法 RT － PCR ；它同時具有 DNA 聚合酶的活性和反轉酶的活性；可用於實時 PCR 。

特征

•  Tth DNA 聚合酶是一種熱穩定性酶，分子量為 92kDa ，從 Thermus thermophilus HB-8 中分離。

•  在 74℃ 時可進行 DNA 複製，在 95℃ 的半衰期為 20 分鐘。

•  Tth DNA 聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向發生聚合反應，形成雙鏈 DNA ，也可在鎂離子存在的條件下，以 RNA 為模板沿 5'—3' 方向發生核苷酸聚合反應。

•  該酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，無 3' － 5' 外切酶活力， 可用於實時熒光 PCR 。

•  能在較高的溫度下進行逆轉錄，增加了引物雜交和延伸的特異性；減少了由於 RNA 二級結構引起的問題。

•  10× 逆轉錄反應緩衝液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反應緩衝液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。

•  無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。

單位定義

在 70℃ 條件下， 30 分鐘內催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為 TCA 不溶性物質所需的酶量為一個單位。反應條件為： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作為底物。

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)

UNG酶用途

因PCR是一種極敏感的擴增技術，易受污染的影響。小量的外源 DNA 污染可以與目的模板一塊被擴增。當前一次擴增產物用來進行新的擴增反應時，會發生共同來源的污染，這稱之為殘餘污染；從其他樣品中純化的 DNA 或克隆的 DNA 也會是污染源。衛生部已經明確規定，凡是用於臨床檢驗的PCR試劑，都應該有 UNG酶技術，以防止污染。

控制污染的方法主要有兩種：

1 、在 PCR 實驗過程中使用良好的實驗步驟和實驗環境減少殘餘污染：使用抗氣霧劑移液管的阻止氣霧劑進入 eppendorf 管內；為 PCR 樣品配製和擴增后分析設計隔離的區域；在準備新反應前更換手套；總是使用不含有模板的陰性對照檢測污染；使用預先混合的反應成分，而不是每個反應的每個試劑單獨加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），這種酶（也稱為尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反應液配製時，將dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得擴增產物含有脫氧尿嘧啶，這種產物對 UNG 敏感，所有可以在PCR前對新配製的反應用 UNG 處理以破坏殘餘產物，杜絕污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經誘導表達后，再經三次過柱純化分離出來的重組蛋白。

•  50ul 體系中，加入0.1U的UNG酶，能夠消除 10 7 帶有 dUTP 的、大於 6 個碱基的雙鏈DNA 污染。

•  反應條件： 37℃ ，2分鐘；反應 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以滅活。

UNG酶　（大宗用戶價格面議，電話：021－54460831）

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反轉錄酶

常見的反轉錄酶主要有： M-MLV 、 AMV 、 Tth 。通常 MLV 用於普通的 RT 反應， AMV 用於基因比較複雜、有二級結構或 GC 含量較高的 RT 反應， T th 用於單酶體系、基因結構較複雜的 RT 反應；如果 cDNA 要用於克隆表達， 建議使用 MLV 或 AMV ；如果用於基因表達水平的檢測或雜交探針的制備，建議使用 Tth 。

RT 反應，引物的選擇

影響 RT 反應的因素

影響 RT 反應的因素比較多，主要是 RNA 的質量，要求沒有 RNA 酶的污染、沒有基因組的污染；另外還有引物的選擇是否合適；酶的濃度是否合適等。

FicoScript®M-M ranscriptase(反轉錄酶)

FicoScript®Reverse Transcriptase（反轉錄酶） is an engineered version of M-M T with reduced RNase H activity and increased thermal stability. The enzyme is purified to near homogeneity from E. coli containing the modified pol gene of Moloney Murine Leukemia Virus . The enzyme can be used to synthesize first-strand cDNA at temperatures up to 48°C, providing increased specificity, higher yields of cDNA, and more fulllength product than other reverse transcriptases. It can generate cDNA from 100 bp to >12 kb.It is suitable for qPCR. 
1 、 Enzyme Storage Buffer: M-M everse Transcriptase is supplied in 20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200mM NaCl, 0.1mM

EDTA, 1mM DTT, 0.01% Nonidet P-40 and 50% glycerol.

2 、 M-M everse Transcriptase 5X Reaction Buffer: When the M-M everse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme is diluted 1:5, it has a composition of 50mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 75mM KCl, 3mM MgCl 2 and 10mM DTT.

3 、 Source: Purified from an E. coli strain expressing a recombinant clone.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 7mM MgCl 2 ,

40mM KCl, 10mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 0.5mM [ 3 H]dTTP, 0.025mM oligo(dT) 50 , 0.25mM poly(A) 400 and 0.01% NP-40.

6 、 Usage Note: M-M everse Transcriptase is less processive than AMV Reverse Transcriptase, and therefore, more units of the M-M nzyme are required to generate the same amount of cDNA as in the AMV reaction. Thus, starting with 1μg of mRNA

in a first-strand cDNA synthesis, 200 units of the M-M nzyme are recommended as opposed to 25 units of the AMV enzyme.

反轉錄酶　（大宗用戶價格面議，電話：021－54460831）

AMV Transcriptase(反轉錄酶)

1 、 AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme has a composition of 250mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 250mM KCl, 50mM MgCl 2 , 2.5mM spermidine and 50mM DTT.

2 、 Enzyme Storage Buffer: AMV Reverse Transcriptase (AMV-RT) is supplied in 200mM potassium phosphate (pH 7.2 4°C ), 0.2% Triton ? X-100, 2mM DTT and 50% glycerol.

3 、 Source: Purified from avian myeloblastosis virus particles.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid multiple freeze-thaw cycles and exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 40mM KCl,

8.75mM MgCl 2 , 10mM DTT, 0.1mg/ml acetylated BSA, 1mM radiolabeled dTTP and 0.25mM poly(A):oligo(dT).

6 、 Usage Notes: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is intended for use in standard first-strand cDNA synthesis reactions. No deoxynucleotides are in the buffer; The formulation of AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is not compatible with M-M everse Transcriptase. Up to 10μl of an RT reaction containing AMV-RT and the supplied AMV Reverse Transcriptase Reaction Buffer can be added

to PCR amplification reactions that use TaqDNA Polymerase.

Rnasin(核糖核酸酶抑制劑或RNA酶抑制劑)

RNA酶抑制劑概述
RNasin 是從人胎盤中提取的特異性RNA酶抑制劑，分子量為 51,000 道爾頓的蛋白質，等電點 pH 值為 4.7 。它能特異地與 RNase 以 300 的抑制常數 (ki) 以非共價鍵結合形成復合體而使 RNase 失去活性。在緩衝液為 0 -0.5M NaCl ， pH5-8 的條件下保持其活性， pH7.8 時活性最高。經嚴格質量檢驗，該產品為電泳純，無 RNase 、 Nickase 污染，比活為 100,000 單位 / 毫克蛋白，達到國際標準。

RNA酶抑制劑特性
1. 抑制一般的真核 RNase 包括 RNaseA 、 B 、 C 和人胎盤 RNase ；
2. 不抑制 RNase H ， S1 核酸酶， SP6 ， T7 和 T3 RNA 聚合酶， AMV 或 M-MLV 反轉錄
酶， Taq DNA 聚合酶， RNase T1 ；
3. 活性 pH 範圍寬廣，但需要 1mM DTT 以保持其活性。

RNA酶抑制劑應用
1. 用在有潛在 RNase 污染的地方。
2. 在 cDNA 合成中保護 mRNA 。
3. 體外轉錄系統、翻譯系統，保護 mRNA 。
4. 用於多核糖體的活性、產量增加。

5. 增進體外病毒複製。
6. 促進同源體系中的 RNA 翻譯。
7. 制備無 RNase 的抗體。
8. 提高 Riboprobe (R) 系統 RNA 合成反應的得率。
濃度 20-40u/ul 。
RNA酶抑制劑單位定義
抑制 5ng RNase A 活性的 50 ％所需酶量為一單位。

儲藏緩衝液

20mM HEPES-KOH pH7.6, 50mM KCl, 8mM DTT, 50% 甘油。

RNA酶抑制劑對核酸酶的選擇性抑制

RNA酶抑制劑的性質    

RNA酶抑制劑　（大宗用戶價格面議，電話：021－54460831）

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