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使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理，來檢測人多巴胺（DA），只能用于研究用途，不得用於醫學診斷。

 

用    途： 用於人血清、血漿及相關液體樣本中多巴胺（DA）的測定。

工作原理

本試劑盒採用的是雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人多巴胺（DA）的水平。向預先包被了人多巴胺（DA）單克隆抗體的酶標孔中加入多巴胺（DA），溫育；洗滌后，加入HRP標記過的多巴胺（DA）抗體。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然後加入底物A、B，產生藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人多巴胺（DA）的濃度呈正相關。

試劑盒組成

1	標準品（2400ng/L）	0.5ml	7	顯色劑A液	3ml
2	標準品稀釋液	3ml	8	顯色劑B液	3ml
3	酶標包被板	12孔×4條	9	終止液	3ml
4	酶標試劑	3ml	10	說明書	1份
5	20倍濃縮洗滌液	20ml	11	封板膜	2張
6	樣品稀釋液	3ml	12	密封袋	1個

需要而未提供的試劑和器材

1．   37℃恆溫箱。

2．   標準規格酶標儀。

3．   精密移液器及一次性吸頭

4．   蒸餾水，

5．   一次性試管

6．   吸水紙

注意事項

1．   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．   各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。

3．   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質含量過高，請先用PBS稀釋一定倍數（n倍）后再按說明書操作進行測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

4．   嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

5．   為避免交叉污染，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜。

6．   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7．   底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊几層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重複此過程數次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本採集后儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

操作程序

1．   標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

1200ng/L	（5號標準品）	120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
600ng/L	（4號標準品）	120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
300ng/L	（3號標準品）	120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
150ng/L	（2號標準品）	120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
75ng/L	（1號標準品）	120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液

2．   分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。  

3．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重複5次，拍干。

4．   每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。  

5．   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重複5次，拍干。

6．   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7．   取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

8．   測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

9．   根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由於樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。