型號: | BPE |
---|---|
品牌: | BP |
原產地: | 中國 |
類別: | 化工 / 生物化學品 |
標籤︰ | elisa , 試劑 , 抗體 |
單價: |
¥1980
/ 盒
|
最少訂量: | 1 盒 |
最後上線︰2022/05/10 |
使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基於生物素雙抗體夾心技術原理,來檢測人存活素(SURVIVIN)),只能用于研究用途,不得用於醫學診斷。
用 途: 用於人血清、血漿及相關液體樣本中存活素(SURVIVIN)的測定。
工作原理
本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人存活素(SURVIVIN)的水平。向預先包被了人存活素(SURVIVIN)單克隆抗體的酶標孔中加入存活素(SURVIVIN),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗SURVIVIN抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然後加入底物A、B,產生藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人存活素(SURVIVIN)的濃度呈正相關。
試劑盒組成
1 | 標準品(1280ng/L) | 0.5ml | 7 | 顯色劑A液 | 6ml |
2 | 標準品稀釋液 | 3ml | 8 | 顯色劑B液 | 6ml |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 終止液 | 6ml |
4 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 生物素標記的抗- SURVIVIN抗體 | 1ml | 12 | 密封袋 | 1個 |
需要而未提供的試劑和器材
1.
2. 標準規格酶標儀。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水,
5. 一次性試管
6. 吸水紙
注意事項
1. 從2
2. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。
3. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
4. 為避免交叉污染,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
6. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊几層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重複此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本採集后儘早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于
操作程序
1. 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):
640ng/L | (5號標準品) | 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
320ng/L | (4號標準品) | 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
160ng/L | (3號標準品) | 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
80ng/L | (2號標準品) | 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
40ng/L | (1號標準品) | 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的儘量做復孔。
3. 加樣:1)空白孔:空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗SURVIVIN抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其餘各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50μl,鏈黴素-HRP50μl(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40μl,然後各加入抗- SURVIVIN抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl,蓋上封板膜,輕輕振盪混勻,
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重複5次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震盪混勻,
7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。