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概述

腹瀉性貝類毒素檢測試劑盒的原理是酶聯免疫吸附測定法，用於水及水產品中腹瀉性貝類毒素的定量測定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對於水產品需要做前處理，不可以直接檢測。如果需要的話陽性樣品可以通過HPLC和GC/MS來驗証。

保存和穩定性

試劑盒應保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復到室溫（20-25℃）。有效期內試劑盒中的試劑都可以使用。

原理

試劑盒的原理是直接競爭ELISA法，通過特異性抗體來識別岡田酸。當樣品中含有岡田酸時，樣品中的岡田酸與岡田酸酶結合物競爭結合溶液中的岡田酸抗體。岡田酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結合。經過一步洗滌加入底物溶液，產生有色反應。產生的綠色的顏色深度與樣品中岡田酸的含量成反比。加入反應停止液后使顏色由藍色轉變為黃色。用酶標儀在450nm處測定吸光度值。通過繪製標準曲線來計算樣品中岡田酸的含量。

7．試劑盒特性

敏感性：1.7ng/ml

重複性：標準的變異係數小於10%，樣品的變異係數小於15%

特異性：

腹瀉性貝類毒素檢測試劑盒能檢測Okadaic acid及其它DSP，它們的結合程度是不同，以下表格中展示的是相關值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級。
種 類
% CR
種 類
% CR

Okadaic Acid (DTX)
100%
Dinophysistoxins DTX-2
50%

Dinophysistoxins DTX-1
50%








樣品：水樣和貝類產品

A．試劑盒組成：

1、包被二抗的微孔板（羊抗兔）

2、標準（7種）0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、ng/ml

3、岡田酸抗體溶液（兔抗岡田酸）6ml

4、岡田酸酶標記物6ml

5、樣品稀釋液（10倍濃縮）25ml，用於稀釋樣品

6、5x濃縮洗液100ml

7、顯色液（底物）TMB,16ml

8、終止液12ml

B.操作步驟

1、在對應的微孔中加入100μL的標準和樣品（推薦做2-3個重複）

2、每個測試孔都加入50 μL岡田酸酶標記物溶液。

3、每個測試孔都加入50 μL岡田酸抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震盪微孔板30秒使裡面的液體混勻。不要使液體灑出。

4、在室溫下孵育60分鐘。

5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。

6、每個測試孔加入150μL的顯色液（底物）。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽光照射。

7、每個測試孔加入100μL終止液。

8、用酶標儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內完成）。

C結果分析

結果分析可以利用商業ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log)。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然後計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以100%）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的岡田酸的濃度做X軸構建標準曲線。通過利用標準曲線，把樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中岡田酸的濃度。樣品中岡田酸的含量小於0.1 ppb認為陰性。當樣品中岡田酸的含量大於5.0 ppb要稀釋后再測定。

D結果分析

可以利用商業ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter來評價ELISA結果。也可以通過計算每個標準的%B/B0值，以%B/B0為y軸、呋喃唑酮為x軸作一標準曲線。樣品濃度可以通過標準曲線來計算。當樣品中的呋喃唑酮濃度低於標準1（0.0125 ng/mL）時，認為樣品中呋喃唑酮的濃度小於0.05 ppb。樣品表現的濃度高于標準6(0.5 ng/mL)時要經過稀釋后再測定。