一、 原理
本試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測水產和雞肉等組織樣本中的AMOZ，在微孔條上預包被上偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行的，樣本中的AMOZ和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗呋喃它酮代謝物的衍生物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的AMOZ含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出呋喃它酮代謝物含量。
二、 試劑盒技術指標：
試劑盒靈敏度： 0.1 ppb
樣本檢測下限：
組織、蜂蜜 0.2 ppb
魚/蝦等水產品組織因存在一定的干擾，檢測下限為0.3 ppb
回收率：
魚/蝦水產組織 90%±15%
蜂蜜/雞肉/肝臟樣本 80%±15%
交叉反應率：
呋喃它酮代謝物 100%
呋喃唑酮代謝物 ﹤0.1%
呋喃妥因代謝物 ﹤0.1%
呋喃西林代謝物 ﹤0.1%
三、試劑盒組成
1．微量測試孔：96T/8孔
2．標準品液： 0 ppb 0.1 ppb 0.3 ppb 0.9 ppb 2.7 ppb 8.1 ppb （1ml/瓶）
3．酶標記物 12ml
4．抗體工作液 7ml
5．底物緩衝液 7 ml
6．底物液 7 ml
7．終止液 7 ml
8．20倍濃縮洗滌液 50 ml
9．復溶液 50 ml
10．15.1 mg衍生化試劑
四、 所用儀器、試劑
具備的儀器： 微孔酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振盪器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器： 單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試 劑： 甲醇、氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、鄰硝基苯甲醛、亞硝基鐵氰化鉀（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）ZnSO4·7H2O
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理需配製：
1．衍生化試劑 稱15.1 mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(濃度10 mM)
2．C液：（供奶樣用）稱12.5 g亞硝基鐵氰化鉀用去離子水定溶至100 mL。
D液：（供奶樣用）稱29.8 g 硫酸鋅用去離子水溶解定溶至100 mL。
3．0.1 M K2HPO4 稱22.8 g K2HPO4·3H2O
加去離子水溶解定溶至1 L
4．1M HCl取8.6 ml濃HCl加水定溶至100 mL。
5．1M NaOH稱取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
樣本的處理
(a) 肉樣或魚蝦
用均質器均質樣本，接（d）的描述方法
(b) 奶樣
1. 取出5 mL的奶樣本到玻璃離心管中，分別加入C液和D液各250 µL。
2. 用振盪器充分混合樣本,用恆溫離心機4000 r/min以上離心10 min(4-12 ℃).若沒有恆溫離心機,則先將樣本降溫至大約8 ℃，然後離心。
3. 接(d)的描述方法
(c) 蜂蜜
1. 取1±0.05 g樣本到離心管中。
2. 加入4 mL的去離子水溶解，再加入0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化試劑,充分振盪。
3. 接(d)第2步描述方法
(d)接上面的方法
1. 取1±0.05 g的均質樣本(肉樣/魚蝦)、牛奶的離心上清液1.1 mL（相當1 mL奶樣），分別加入4 mL的去離子水，0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化試劑，充分振盪。
2. 置於56 ℃環境中孵育（2 h）。
3. 分別加入5 mL 0.1 M K2HPO4， 0.4 mL1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振盪30 s。
4. 在室溫下（20-25 ℃）4000 r/min以上離心10 min。
5. 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一潔淨容器中于50 ℃氮氣/空氣吹干。
6. 用1 mL正己烷溶解乾燥物，用1mL已稀釋好的復溶液充分混合；在室溫下（20-25 ℃）4000 r/min以上離心10 min。
7. 取50µl下層相用於分析。
樣本稀釋倍數：2
六、操作步驟
1． 將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存於2-8 ℃，不要冷凍。
3． 加標準品/樣本50 µL /孔，然後加入抗體工作液50 µL/孔，再振盪混勻，用封板膜蓋板，室溫反應30 min。
4． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5． 加入酶標記物100 µL/孔，用封板膜蓋板，室溫反應20 min。
6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7．顯色：每孔加入底物緩衝液50µl，再加底物液50µl，輕輕振盪混勻，室溫環境下避光顯色10min。
8．測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振盪勻，設定酶標儀于450nm處（在20min內讀完數據），測定吸光度值。
七、結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以AMOZ標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中AMOZ實際濃度。
八、注意事項
1．室溫低於20 ℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25 ℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2．洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3．混合要均勻，洗板要徹底，否則會出現重複性不好的現象。
4．反應終止液為2 M硫酸，避免接觸皮膚。
5．將不用的微孔板放進自封袋重新密封; 標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6．不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號試劑盒中的試劑。
7．顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之，0標準的吸光度值小於0.6時，表示試劑可能變質。
8．該試劑盒最佳反應溫度為25 ℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
九、儲藏條件和保質期
儲藏條件：試劑盒于2-8 ℃保存，不要冷凍。
保質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒
