一、原理
本試劑盒採用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的甦丹紅和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭甦丹紅抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物甦丹紅的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應甦丹紅的含量。
二、試劑盒技術指標
試劑盒靈敏度： 0.4ppb
樣本定量檢測下限
水基質（番茄醬、壇壇鄉） 0.4ppb
油基質（辣椒油，辣椒醬） 0.4ppb
粉末狀（辣椒粉） 1.0ppb
交叉反應率
甦丹1號 ……………………………………………… 100%
甦丹2號 ……………………………………………… ＜1%
甦丹4號 ……………………………………………… ＜1%
對位紅 ………………………………………………… 120%
樣本回收率
水基質 ……………………………………………… 75±10%
油基質 ……………………………………………… 50±10%
粉末狀 ……………………………………………… 65±10%
三、 試劑盒組成
1、微量測試孔：96T
2、 標準品液：（1ml/瓶） 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb
3、 酶標記物 12ml
4、 抗體工作液 7ml
5、 底物緩衝液破 7ml
6、 底物液 7ml
7、 終止液 7ml
8、 20倍濃縮洗滌液 50ml
9、1mg/ml標準品液：（0.2ml）
四、樣本處理
取1g樣品（辣椒面、辣椒油、辣椒醬、番茄醬），加入3 mL丙酮溶液，超聲震盪20 min，渦旋混合0.5 min，靜置10 min， 3000 r/min離心分離10 min，取上清100 μL用PBST稀釋10倍至1 mL，取50 μL進行ELISA測定。
五、操作步驟
1. 將試劑盒從冷藏環境中取出，置於室溫（20～26℃）下平衡30min以上，將需用的條板固定于支架，按順序編號；
2. 洗液配製：將50 mL濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水稀釋至1000 mL備用。（或按需量稀釋）
3. 標準品的配製：先將試劑盒中的1 mg/mL甦丹紅標準品用洗液稀釋1000倍，變成1000 ng/mL，再用洗液將1000 ng/mL的標準品分別稀釋成0.4 ng/mL， 3.2 ng/mL，6.4 ng/mL，12.8 ng/mL，25.6 ng/mL。（現配現用）
4. 在標準品孔中加入50 μL標準品，樣品孔加入50 μL待測樣品，然後每孔加入50 μL抗體（加入標品和樣品時無時間差的影響），輕拍混勻，37℃下孵育30min；
5. 倒出孔中的液體，以試劑盒濃縮洗液稀釋20倍后作為洗液，用洗板機洗滌4～6遍；沒有洗板機的用戶可用300 μL洗液充入各孔中，靜置20 s，倒出孔中的液體，將微孔架倒置，在吸水紙上連續拍打3次以上，以保証完全除去孔中的液體，重複操作4～6遍；
6. 每孔加入酶標記物100 μL，輕輕振盪混勻，用蓋板膜蓋板後置37℃ 環境中反應20 min ，取出重複洗板步驟。
7. 顯色：每孔加入底物緩衝液50 μL，再加底物液50 μL．輕輕振盪混勻，用蓋板膜蓋板后，置37℃ 環境中反應10 min。
8. 測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振盪混勻．設定酶標儀于450 nm處（建議用雙波長450/630 nm 檢測，在20 min內讀完數據），測定每孔OD 值，根據標準曲線計算樣品濃度。
標準樣品配製方法：
（1）準備5個1 mL瓶子，其中一個加入1000 μL洗液，一個加入700 μL洗液，其餘的分別加入500 μL洗液。
（2）在1000 μL洗液瓶子中先吸出25.6 μL的洗液，然後加入25.6 μL的1000 ng/mL標準品，
混勻，使其濃度為25.6 ng/mL，作好記號；
（3）再從25.6 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為12.8 ng/mL，混勻，作好記號；
（4）再從12.8 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為6.4 ng/mL，混勻，作好記號；
（5）再從6.4 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為3.2 ng/mL，混勻，作好記號；
（6）再從3.2 ng/mL的瓶子中吸出100 μL加入其中一個700 μL洗液的瓶子中，使其濃度為0.4 ng/mL，混勻，作好記號。 （加樣前應將標準品充分混勻，配好后在半小時內使用）
七、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以甦丹紅標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中甦丹紅實際濃度。
八、 注意事項
1．室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2．洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3．混合要均勻，洗板要徹底，否則會出現重複性不好的現象。
4．反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5．將不用的微孔板放進自封袋重新密封; 標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6．不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號試劑盒中的試劑。
7．顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之，0標準的吸光度值小於0.6時，表示試劑可能變質。
8．該試劑盒最佳反應溫度為25 ℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
九、儲藏條件和保質期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。
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