一、原理
本試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測豬尿、組織、飼料中的沙丁胺醇，在微孔條上預包被上偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行的，樣本中的沙丁胺醇和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗沙丁胺醇抗體，再加入酶標二抗，用TMB底物顯色，樣品中的沙丁胺醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出沙丁胺醇含量。
二 、試劑盒技術指標
試劑盒靈敏度：0.1 ppb
檢測下限
組織樣本（雞肉/肝、豬肉/肝） 1.0 ppb
豬尿 0.1 ppb
交叉反應率
沙丁胺醇（Salbutamal） 100%
克倫特羅（Clenbuterol ） ﹤10%
萊克多巴胺（Ractopamine） < 0.1%
腎上腺素（Adrenalin） < 0.1%
去甲腎上腺素（Noradrenalin） < 0.1%
異丙腎上腺素（Isoporterenol） < 0.1%
樣本回收率
組織樣本（雞肉/肝、豬肉/肝） 90±20%
豬尿 100±20%
三、試 劑 盒 組 成
1. 酶標板： 96T/8孔
2. 標準品液:： 0 ppb、0.1 ppb、0.4 ppb、1.6 ppb、6.4 ppb、25.6 ppb（1mL/瓶）
3. 抗體工作液 1瓶（7 mL）
4. 酶標記物： 1瓶（12 mL）
5. 底物緩衝液： 1瓶（7 mL）
6. 底物液： 1瓶（7 mL）
7. 終止液： 1瓶（7 mL）
8. 20倍濃縮洗滌液： 1瓶（50 mL） 加蒸餾水稀釋到1000 mL
9. 樣品稀釋液： 1瓶（12 mL） 用於稀釋尿樣
四. 樣品處理
尿樣：（稀釋倍數為2）
先加入25μL樣品稀釋液，再加入25μL尿樣到微孔板中，混合均勻。渾濁尿樣以4000 rpm離心5 min，取上清（清亮部分）。
豬肝、豬肉等組織
前處理配製的溶液
配液1：0.5M鹽酸溶液
量取41.5ml濃鹽酸加入去離子水定容到1000 ml
配液2：8%氯化鈉溶液
稱取80.0g氯化鈉，加1000ml去離子水溶解混勻
配液3：提取液
配液1：配液2=1：4比例混合
配液4：1M氫氧化鈉溶液
稱取20.0g氫氧化鈉
1． 稱2±0.05 g組織放入15ml的離心管中，加入6 mL 提取液，充分搖勻后放置5-10 min；
2． 室溫4000 r/min 以上離心5 min；
3． 移取1ml 上清液到2ml離心管中，加入45μL配液4溶液，混勻，調整PH值7-8。
4. 取50μL下層進行分析。
樣本稀釋倍數：4
飼料（稀釋倍數10）
1．用研缽研碎飼料，稱1 g研碎的飼料樣品加入10 mL 0.01 M的鹽酸，充分混合5 min。2．檢查pH值是否在6.5-8之間，否則用氫氧化鈉或鹽酸調節。
3．3500 rpm離心5 min，轉移出上清液（如上清液仍然渾濁可提高轉速或用濾紙過濾）。4．吸取50μL進行檢測。
五、操作步驟
1． 將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存於2-8 ℃，不要冷凍。
3． 加標準品/樣本50 µL /孔，然後加入抗體工作液50 µL /孔，再振盪混勻，用封板膜蓋板，37 ℃反應30 min。
4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
5．加入酶標記物100 µL /孔，用封板膜蓋板，37 ℃反應20 min。
6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7． 顯色：每孔加入底物緩衝液50 µL，再加底物液50 µL，輕輕振盪混勻，37 ℃環境避光顯色10 min。
8． 測定：每孔加入終止液50 µL，輕輕振盪勻，設定酶標儀于450 nm處（在20 min內讀完數據），測定吸光度值。
六、結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以沙丁胺醇標準品濃度（ng/mL）的半對數為橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中沙丁醇實際濃度。
七、注意事項
1. 終止液為2 M硫酸，避免接觸皮膚。
2. 不要使用已過有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。
3. 0標準液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質，請勿使用。
4. 顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。
八、儲藏條件和保質期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒
