一、用途
萊克多巴胺屬β-受體激動劑類藥物，人體食入易出現毒副作用，因此許多國家都將其列為違禁藥物。國家衛生部、農業部、藥品監督管理局發出的公告明確禁止萊克多巴胺在食用動物中使用。 HPLC或GC-MS一直用作檢測β-興奮劑的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費用昂貴。酶聯免疫檢測試劑盒則可經濟、快速地檢測尿，肌肉，肝臟及飼料中的萊克多巴胺。本試劑盒採用直接競爭酶標免疫法定量測定尿樣、肝臟、水、飼料和肌肉中的萊克多巴胺。
二、測定原理
萊克多巴胺檢測試劑盒是利用免疫學直接競爭法的原理，固相載體微孔板上包被有萊克多巴胺蛋白偶聯物，加入待測萊克多巴胺標準品或樣品溶液及萊克多巴胺的酶標記物抗體，包被在微孔板上的萊克多巴胺蛋白偶聯物和標準品或樣品中的萊克多巴胺競爭性地與酶標記物抗體結合，形成抗原抗體復合物；洗滌后加入顯色劑，結合的酶標記物將無色的顯色劑轉化為藍色的產物；加入反應終止液后使顏色由藍色變為黃色；在450 nm波長進行檢測，樣品中的萊克多巴胺濃度與吸收光強度成反比。
三、試劑盒組成
（1）96孔酶標板： 1塊 96T/8孔。
（2）標準品： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1mL/瓶）
（3） 酶標記物： 1瓶（7 mL）。
（4）底物緩衝液： 1瓶（7 mL）。
（5）底物液： 1瓶（7 mL）。
（6）終止液： 1瓶（7 mL）。
（7）20倍濃縮洗滌液： 1瓶（50 mL）， 加蒸餾水稀釋到1000 mL 。
（8）使用說明書 1 份
（9）封板膜： 2 張
（10）封口袋： 1 個
四、技術參數
靈敏度：0.1 ppb
半抑制濃度（IC50）：≤1.0 ppb
標準曲線範圍：0.1-8.1 ppb
精確度：板內變異誤差小於10%，板間變異誤差小於15%
準確性（回收率）：尿液、組織、飼料：100±20%
五、 交叉反應活性：
Analytes Cross-reactivity
Ractopamine 100.0
Ractopamine Gluc.A 1.0
Ractopamine Gluc B 5.8
Ractopamine Gluc C 387.0
(1S,3S) –Ractopamine 1.9
(1R,3S)-Ractopamine 0.9
(1S,3R)-ractopamine 98.5
(1R,3R)-ractopamine 451.7
Dobutamine 0.1
Ritodrine 2.4
Isoxsuprine 0.1
Salmeterol 0.1
Fenoterol 0.1
Clenbuterol <0.01
Salbutamol <0.01
六、樣品處理
1．尿樣 （稀釋倍數為1）
取50 μL尿樣進行實驗。渾濁尿樣以4000 r/min離心5分鐘，取上清（清亮部分）。
2．組織 （稀釋倍數為1）
a． 取2g±0.05 g組織，加入6 mL乙腈-0.1 M HCl（V乙腈：VHCl=84：16），振盪10 min,室溫4000 r/min以上離心10 min。
b． 取上清3 mL，加入2 mL 0.1M NaOH，加入6 mL乙酸乙酯，振盪10 min，室溫4000 r/min以上離心10 min。取全部上清于50 ℃氮氣或空氣吹干。
C． 加入1 mL雙蒸水復溶，取50 μL進行分析。
3． 飼料（稀釋倍數10）：
用研缽研碎飼料，稱1 g研碎的飼料樣品加入2 mL的0.01 M的PBS，渦旋5分鐘。用20000 rpm離心5分鐘，轉移出上清液。吸取10 μL加入40 μL0.01 M的PBS中進行檢測。
七、 操作步驟
1． 將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡田30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存於2-8 ℃，不要冷凍。
3．加入50 μL樣品或標準品到微孔板中，再加入50 μL酶標記物到微孔板中，充分振盪混勻，用蓋板膜蓋板后，室溫下反應30 min（或37℃下反應20 min）。
4． 棄去孔中液體，每孔注滿稀釋好的濃縮稀釋液，輕輕振盪，棄去孔中液體，並在吸水紙上拍干，重複6次。
5．加入50 μL底物液緩衝液，再加入50 μL底物液，輕輕振盪混勻，用蓋板膜蓋板后，在室溫（或37℃）暗處孵育10 min。
6．加入50 μL終止液到微孔板中，混合好在450 nm處測量吸光度值，必須在加入終止液后20 min內讀取光度值。
八、 注意事項
1．使用之前將所有試劑回升至室溫，使用之後立即將所有試劑放回2-8 ℃。在EIA分析中的重複性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
2．終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
3．不要使用過了有效日期的萊克多巴胺檢測試劑盒，不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。
4．0標準品的OD值小於0.5時，表示試劑可能變質，請勿使用。
5．顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。
九、儲存條件
1． 2-8℃保存，切勿冷凍。
2． 將不用的酶標板放進帶乾燥劑的封口袋中密封保存。
3． 酶標記物和顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
